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瓊脂糖凝膠電泳技術介紹
更新時間:2016-03-24 點擊次數(shù):1691

一、凝膠制備

1.微波爐溶解瓊脂糖時,膠液沸騰沖溢出三角錐瓶微波爐加熱時膠液可能發(fā)生劇烈沸騰,

    1)總液體量不宜超過三角錐瓶的 50% 容量,

    2)2% 以上膠液設置中火加熱

    3)膠液劇烈沸騰時,停止加熱,移開三角錐瓶,請戴上防熱手套,小心搖動三角錐瓶,然后再次加熱,膠液沸騰直至膠液清澈,保證瓊脂糖*溶解。

2.瓊脂糖電泳圖像背景模糊不清

瓊脂糖沒有*溶解會造成電泳圖像背景模糊不清。 *溶解的瓊脂糖膠液清澈,三角錐瓶內(nèi)壁應沒有粘附瓊脂糖顆粒。

3.加熱后水分蒸發(fā),如需要應加入熱的蒸餾水,補足到原來的重量,搖勻。

二、 電泳

1.DNA 條帶模糊,拖尾

   1) DNA 降解。避免核酸酶污染。

   2)DNA 上樣量過多。減少凝膠中 DNA 上樣量。

   3) 電泳緩沖液陳舊: 電泳緩沖液多次使用后,離子強度降低, pH 值上升,緩沖能力減弱,從而影響電泳效果。建議經(jīng)常更換電泳緩沖液。

   4)電泳條件不合適。電泳時電壓不應超過 20V/cm ,溫度<30 ℃ ,巨大 DNA 鏈,溫度應<15 ℃,核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力。

   5)DNA 樣含鹽過高。泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽。

   6)有蛋白污染。電泳前抽提去除蛋白。

   7)DNA 變性。電泳前勿加熱,用 20mM NaCl 緩沖液稀釋 DNA 。

2.DNA 條帶淡弱或無 DNA 帶

   1)DNA 的上樣量不夠:增加 DNA 的上樣量。

   2)DNA 降解:避免 DNA 的核酸酶污染。

   3)DNA 走出凝膠:縮短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度。

   4)分子大小相近的 DNA 帶不易分辨。增加電泳時間,使用正確的凝膠濃度。

   5)DNA 變性:電泳前請勿高溫加熱 DNA 鏈,用 20mM NaCl Buffer稀釋DNA 。

   6)DNA 鏈巨大,常規(guī)凝膠電泳不合適。在脈沖凝膠電泳上分析。

3.DNA MARKER 條帶扭曲

   1)配制凝膠的緩沖液和電泳緩沖液不是同時配制的。使用同時配制的緩沖液。電泳時緩沖液高過液面1 - 2mm 即可。

   2)電泳時電壓過高??梢栽陔娪厩?15 分鐘用較低電壓 (3V/cm), 等條帶出孔后,再調(diào)電壓。

   3)盡量慢慢加樣 ,等樣品自然沉降后再加電壓。

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