凝膠成像切膠操作時(shí)注意事項(xiàng)
更新時(shí)間:2016-03-30 點(diǎn)擊次數(shù):1306
1. 電泳的buffer和gel都是新制的,切膠的臺子清理干凈,刀片洗凈滅菌,總之一句話就是保證切下的帶沒有外源dna污染。
2. 切膠是要把整個(gè)目的片斷所在位置的膠全部回收。為了減少膠的體積,可以用相對比較薄的膠來做,只要夠點(diǎn)樣即可,也可采用薄而寬的梳子來跑膠。
3. 關(guān)于防護(hù),在一般有機(jī)玻璃后就足夠了,戴上防護(hù)面具以保護(hù)眼睛,如果戴樹脂眼鏡就可以了。要是非常害怕紫外照射,或者對于膠有特殊要求,例如要求不含EB,可以采用點(diǎn)marker和帶刻度的尺子一起照相的方法來確定目的條帶在膠上的位置進(jìn)行切膠。
4. 按照正常程序點(diǎn)marker跑膠,然后切下有marker的膠,EB染色,紫外燈下與帶刻度的尺子一起照相。由于要回收的帶與marker間的相對位置已知,根據(jù)尺子來衡量未染色膠上目的帶的位置即可。如果覺得很難判斷,可以直接在marker邊點(diǎn)少量的樣,這樣位置就容易確定了。