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技術(shù)專題：凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質(zhì)（一）原理凡鹽析所獲得的粗制蛋白質(zhì)（鹽析得到的IgG）中均含有硫酸銨等鹽類，這類將影響以后的純化，所以純化前均應(yīng)除去，此過程稱為“脫鹽”（desalthing）。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法，這兩種方法各有利弊。前者的優(yōu)點是透析后析品終體積較小，但所需時間較長，且鹽不易除盡；凝膠過濾法則能將鹽除盡，所需時間也短，但其凝膠過濾后樣品體積較大。所以，要根據(jù)具體情況選擇使用。前實驗中樣品體積較小，凝膠達濾后樣品體積不會太增加，所以選用凝膠過濾法。（二）試劑與器材（1）Sephadex...
3-1 2019
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專題蛋白質(zhì)技術(shù)的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗[原理]蛋白質(zhì)在十二烷基硫酸鈉（SDS）和巰基乙醇的作用下，分子中的二硫鍵還原，氫鍵等打開，形成按1.4gSDS/1g蛋白質(zhì)比例的SDS-蛋白質(zhì)多肽復合物，該復合物帶負電，故可在聚丙烯酰胺凝膠電泳中向正極遷移，且主要由于凝膠的分子篩作用，遷移速率與蛋白質(zhì)的分子量大小有關(guān)，因此可以濃縮和分離蛋白質(zhì)多肽。聚丙烯酰凝膠電泳分離蛋白質(zhì)多數(shù)采用一種不連續(xù)的緩沖系統(tǒng)，主要分為較低濃度的成層膠和較高濃度的分離膠，配制凝膠的緩沖液，其pH值和離子強度也相應(yīng)不同，故電泳時，樣品中的SDS-多肽...
3-1 2019
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蛋白質(zhì)技術(shù)專題：聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度（一）原理由于聚丙烯酰胺凝膠的濃度可以按要求配制，因此可以形成“連續(xù)系統(tǒng)”和“不連續(xù)系統(tǒng)”兩種電泳系統(tǒng)。“不連續(xù)系統(tǒng)”大的特點在于大大提高了樣品分離的分辨率。這種電泳的主要特點是：（1）使用兩種不同濃度的凝膠系統(tǒng)；（2）配制兩種凝膠的緩沖溶液成分及pH不同，并且與電泳槽中電泳緩沖液的成分、pH也不相同。在實驗中，電泳凝膠分為兩層：上層膠為低濃度的大孔膠，稱為濃縮膠或成層膠，配制此層膠的緩沖液是Tris-HCl，pH6.7；下層膠則是高濃度的小孔膠，稱為分離膠或電泳膠，成膠的緩...
2-27 2019
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蛋白質(zhì)技術(shù)專題：血清蛋白瓊脂糖凝膠電泳【原理】瓊脂糖（agarose）是經(jīng)過挑選，以質(zhì)地較純的瓊脂（agar）作為原料而制成的。瓊脂在化學上是由瓊脂糖和瓊脂膠組成的復合物。瓊脂膠是一含有硫酸根和羥基的多糖，它具有離子交換性質(zhì)，這種性質(zhì)會給電泳及凝膠過濾以的影響。瓊脂糖是直鏈多糖，它由D－半乳糖和3,6－脫水－L－半乳糖的殘基交替排列組成。瓊脂糖主要通過氫鍵而形成凝膠。電泳時因凝膠含水量大（98－99%），近似自由電泳，因為固體支持物的影響少，故電泳速度快，區(qū)帶整齊。而且由于瓊脂糖不含帶電荷的基團，電滲影響很少，是...
2-27 2019
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蛋白質(zhì)技術(shù)專題：凝膠過濾層析實驗凝膠過濾層析（gelfiltrationchromatography）法又稱排阻層析或分子篩方法，主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的大小和形狀，即蛋白質(zhì)的質(zhì)量進行分離和純化。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)物質(zhì)，多是交聯(lián)的聚糖類物質(zhì)，使蛋白質(zhì)混合物中的物質(zhì)按分子大小的不同進行分離。實驗方法蛋白質(zhì)的凝膠過濾分離實驗材料蛋白質(zhì)試劑、試劑盒凝膠過濾緩沖液儀器、耗材布氏漏斗凝膠過濾層析柱分光光度計實驗步驟1.如果凝膠過濾的介質(zhì)是干粉，則需在凝膠過濾緩沖液中*溶脹。2.在遠離過往通道及直接光照的...
2-25 2019
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瓊脂糖凝膠電泳的原理及實驗過程實驗原理瓊脂糖凝膠電泳常用于分離、鑒定DNA、RNA分子混合物，以瓊脂凝膠作為支持物，利用DNA分子在電場中時的電荷效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，達到分離混合物的目的。DNA分子在高于其等電點的溶液中帶負電，在電場中由陰極向陽極運動。在一定的電場強度下，忽略DNA分子攜帶的電荷，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應(yīng)，即分子本身的大小和構(gòu)型是主要的影響因素。DNA分子的遷移速度與相對分子量成反比。不同構(gòu)型的DNA分子的遷移速度不同。如環(huán)形DNA分子樣品，其中有三種構(gòu)型的分子：超螺旋分子（c...
2-25 2019
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蠕動泵、恒流泵及軟管泵的選型方法蠕動泵的原理簡介：蠕動泵由于輸出的流量非常穩(wěn)定因此又叫恒流泵，由于蠕動泵是靠擠壓軟管而達到泵送流體的功能的因此又叫軟管泵。蠕動泵的機械原理十分簡單。它是由轉(zhuǎn)輪擠壓著泵管并轉(zhuǎn)動從而推動管內(nèi)的流體向前移動從而產(chǎn)生流體流動的，就象用兩根手指夾擠一跟充滿液體的軟管一樣，隨著手指的移動，管內(nèi)形成負壓，液體隨之流動。蠕動泵、恒流泵和軟管泵的特點：1、潔清無污染：流體只通過和接觸蠕動泵軟管。2、精度高：恒流、重現(xiàn)精度高達0.5%，流量可**調(diào)節(jié)。3、低剪切力：是輸送剪切敏感，侵蝕性強流體的...
2-20 2019
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按工作原理對恒流泵的分類1.容積式泵靠工作部件的運動造成工作容積周期性地增大和縮小而吸排液體，并靠工作部件的擠壓而直接使液體的壓力能增加。根據(jù)運動部件運動方式的不同又分為：往復泵和回轉(zhuǎn)泵兩類。根據(jù)運動部件結(jié)構(gòu)不同，有：活塞泵和柱塞泵;有齒輪泵、螺桿泵、葉片泵和水環(huán)泵。2.葉輪式泵葉輪式泵是靠葉輪帶動液體高速回轉(zhuǎn)而把機械能傳遞給所輸送的液體。根據(jù)泵的葉輪和流道結(jié)構(gòu)特點的不同可分為：1）離心泵2）軸流泵3）混流泵4）旋渦泵。3.噴射式泵是靠工作流體產(chǎn)生的高速射流引射流體，然后再通過動量交換而使被引射流體...
1-31 2019
